안녕하세요, 본 연구실의 박사 2년차 신진우 학생이라고 합니다. 간략하게 답변 드리겠습니다.
1. 애기장대 종자 구하는 방법 및 구입처
- 애기장대 종자는 작물은 아니므로 회사 같은데서 따로 팔진 않을 것으로 생각됩니다. 애기장대를 연구하는 대학의 연구소등에서 분양 받으셔야 될 듯 합니다. 중요한 돌연변이체가 아닌 야생형애기장대를 얻기는 그다지 어렵지 않으실 겁니다. (참고로 미국 오하이오 주립대의 애기장대종자센터에서는 종자풀당 몇천원 정도의 가격에 야생형과 돌연변이체 등도 판매하고 있긴 합니다.
http://www.arabidopsis.org - 이 홈페이지는 전세계 애기장대 연구에 관한 모든 데이터를 모아 둔 곳입니다. 사이트를 잘 보시면 애기장대에 대한 많은 정보도 얻으실 수 있습니다.)
우리 연구실에서 분양 받고 싶으시면 지도교수님이신 이일하 교수님께 연락해보시기 바랍니다.
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2. 발아시키는 법 및 토양
- 사실 애기장대는 원래 잡초기 때문에 오래되어 활력이 떨어진 종자만 아니라면 손쉽게 발아를 합니다. 다만, 종자 크기도 매우 작고 발아에 빛도 필요하므로, 흙속에 묻어버리면 발아하기가 어렵습니다. 그래서 흙에 파종하시려면 흙 표면에 살짝 놓아두시거나 (물 묻은 이쑤시개를 이용하면 종자를 하나씩 붙여서 파종가능) 그냥 손으로 흩뿌리시기만 해도 됩니다. 중요한 것은 발아초기의 습도 관리인데, 종자를 파종할 흙은 미리 젖어 있어야 하고(화분을 만드신후, 물받침에 물을 채워 두시면 한시간쯤 지나서 화분 표면까지 물이 올라옵니다. 이와같은 관수 방법을 저면 관수법이라고 합니다.), 발아 후 떡잎이 올라올 때 까지 랩이나 투명한 플라스틱 뚜껑으로 화분을 덮어두셔서 빛은 들어오게 하고 습도를 유지시켜 주셔야 합니다. 흙에 바로 파종하는 것이 그냥 가정집에서 키우거나 할때는 상대적으로 쉬운 편이네요.
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하지만 더 일반적으로 실험실 등에서 발아를 시킬때는 처음에는 흙이 아닌 배지에서 발아를 시킨 후 발아 후 7일 정도 지나서 흙판으로 이식(Transplanting)을 합니다. 아무래도 배지는 pH 조성이 맞고 영양분이 많으며 후에 이식이 용이하고 여러 다른 실험등에 이용하기 용이하니까요. 다만 배지에 종자를 파종 시킬때는 멸균과정을 거치지 않으면 곰팡이등의 오염으로 인해서 식물이 다 죽어버려 먼저 건조된 애기장대 종자를 멸균하는 과정부터 거쳐야 합니다. 이때 무균대(clean bench)등의 시설이 있어야 합니다.
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[배지조성]
일반적으로 쓰는 배지는 MS 배지 인데요, 실험도구상에서 파는 MS power 를
물 1L당 2.2g 을 넣고(이게 0.5X MS 배지를 만드는데 필요한 양입니다.) sucrose를 10g (1%) 넣어서 녹여 만든 후 pH를 5M KOH를 첨가하여 5.7로 맞추고, Plant Agar 를 10g(1%) 첨가하여 섞은 후 용기를 밀봉하여 습윤멸균(Autoclave) 시킨 후 클린벤치에서 150mm x 20mm 정도의 알맞은 페트리 디쉬 용기에 부어 굳힌 후 사용하시면 됩니다.
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[종자멸균법및파종]
파종할 적정수의 종자를 1.5ml e-tube 등에 넣고 멸균액을 1ml 정도 채워 10분간 흔들어주고(또는 로테이터등의 기계이용)
비운 후 1번 반복하고, 클린벤치 안에서 100% 에탄올을 채운 후 마이크로 피펫으로 종자와 에탄올을 함께 따서 미리 멸균해둔 5x5 cm 정도의 종이(1m paper)에 종자를 놓고 말린 후 만들어둔 배지에 파종하고 3M micropore tape로 뚜껑을 밀봉 하면 됩니다. 75% EtOH 0.05% Triton X-100 섞은 용액을 멸균액으로 씁니다.
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[저온 처리 및 배양실 조건]
종자를 플레이트에 파종 및 밀봉한 후에 사실 바로 빛을 주고 키워도 됩니다만, 종자의 발아 촉진 및 균일한 발아를 위해서 4도의 저온을 3일간 처리합니다. 가정집에서는 그냥 냉장고에 넣어두시면 됩니다. 그다음에 플레이트를 배양실로 옮깁니다.
일반적인 조건의 배양실은 하루에 16시간은 빛이 켜져있어야 하고, 8시간은 꺼져 있어야 합니다. 조도는 100 micromole/m2sec 정도를 유지시키면 되는데, 이게 어느정도냐면 90 cm 길이의 32W 형광등 4개가 식물체의 50 cm 정도 위에 있으면 됩니다. 상대습도는 55~66%, 온도는 22도 내외입니다.
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[화분]
실험실에서 작은 화분을 쓰기도 하지만, 원예자재 판매상 (인터넷에서는 다농과 같은 사이트에서 판매할 것입니다.) 같은데서 쉽게 구 할 수 있는 육묘용 플러그묘판을 주로 사용합니다. 보통 50구(5 x 10) 또는 32구 ( 4 x 8 )정도의 판을 이용합니다.
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[흙]
배양토를 쓰면 됩니다. 현재 저희 랩에서는 농우바이오에서 판매하는 원예범용상토 '식물세계' 에 질석을 5-10%정도 첨가하여 섞은 것을 배양토로 쓰고 있습니다.
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3. 애기장대의 꽃형성과정에서 나타나는 감수분열 세포 관찰
일단 꽃을 얻으려면 아무래도 흙에서 키우셔야 합니다. 조기개화 애기장대 품종이라도 특별한 돌연변이체가 아니라면 발아 후 개화까지 1달이 걸리는데요, 배지에서 식물을 오래 키우면 스트레스를 받아서 2주 이상 키우는 것은 어렵습니다. 물론 마젠타 박스등의 조직배양 용기를 만들어 식물을 파종해서 키우면 그 안에서 개화를 해서 꽃이 피기도 합니다만 흙에서 키운 것보다 작고 건강하지 않습니다. 또 곰팡이 오염등에 대한 염려도 더 많이 해야 되구요.
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다만, 애기장대는 원하시는 목적(감수분열세포의 염색체 관찰)에 잘 부합하지는 않는, 약간은 부적절한 재료임이 아닌가 생각됩니다. 저도 제 연구분야와 관련이 없어서 자세히는 모릅니다만, 애기장대에서 감수분열하는 세포의 염색체를 보려면
Pollen이나 Ovule등을 DADI staining 등을 하던지 해야 할 것 같은데요, 우선 현미경이 무척 좋아야 합니다. 일반적으로 보통의 현미경으로 애기장대 pollen cell 같은거 보면 핵이 점으로 보일뿐인데 염색체가 어느정도 수준으로 관찰될지 해상도는 잘 모르겠습니다. 또 관련 시약들을 set up 하기가 쉽지는 않으실 겁니다. 혹시 NCBI 등을 이용하실 수 있으시다면, arabidopsis, karyotyping, chromosome, meiosis 등의 키워드로 관련 논문들을 검색해 보면 방법등이 나와 있을 것 같긴 합니다만, 국내에 그런 것을 하는 애기장대 연구 실험실이 있는지는 저도 잘 모르겠어서 조언을 드리기가 약간 어렵네요.
오히려 크기가 아예 큰 재료 , 예를 들어 백합같은 것의 꽃가루와 씨방 세포등을 이용하시는게 좋지 않을까 생각됩니다.
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실험실에서 직접 실험을 배우고 싶으시면 말씀 드렸듯이 지도교수님과 연락을 해보셔야 할 듯합니다.
부족하나마 도움되셨길 바랍니다.
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신진우 드림.
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Subject :애기장대 키우는 방법
Posted by :한병수
Date :2011-08-17 01:36:36
안녕하세요?
제가 말로만 듣던 애기장대를 키워보고 싶은데, 모르는게 너무 많습니다.
시골에서 자라 종자 심고 추수하는 것은 부모님을 따라해보기도 했지만 생물학에서 늘 등장하는 귀여운 식물 애기장대를 키워본적은 정말로 한번도 없는 사람입니다. 그런데 꼭 키워보고 싶습니다.
바쁘시겠지만 도움 부탁드리겠습니다.(약간 급합니다.)
제가 궁금한 점은 다음과 같습니다.
1. 애기장대 종자 구하는 방법 또는 구입처
2. 애기장대 발아시키는 방법 : 배지 또는 토양
1) 배지 만드는 방법과 이때 필요한 재료 및 시약
2) 토양 재배시 배양토를 구입해야 한다고 들었는데요, 어디서 무엇을 구입하면 될까요?
3. 현재 제가 필요한 것은 애기장대의 꽃입니다. 꽃형성 과정에서 나타나는 감수분열을 관찰하고 싶습니다. 이때 꽃이 나타나는 정도까지 키우기위해서는 배지에서 키워야할까요? 토양에서 키워야할까요?
연구로 많은 바쁘실텐데 여러가지 질문을 드려 죄송합니다.
하지만 꼭 알고 싶습니다. 가급적 쉬운 용어로 자세하게 부탁드립니다.
설명해주시면 감사하겠습니다.
P.S : 혹시 연구실에 방문해서라도 배울 수 있다면 찾아뵙고 배우겠습니다. |
